"методические указания по газохроматографическому определению гексафлумурона (сонета) в воде, почве, картофеле и ботве" (утв. минздравом ссср 29.07.1991 n 6212-91)

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6212-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ
ГЕКСАФЛУМУРОНА (СОНЕТА) В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КАРТОФЕЛЕ И БОТВЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика препарата
F O O Cl
_____/ \\ \\ _____/
// \\---C-N-C-N-// \\-O-CF -CF H C H Cl F N O .
\ ___ / ¦ ¦ \ ___ / 2 2 16 8 2 6 2 3
--- \ H H --- \
F Cl М.м. 461.
Гексафлумурон (сонет, консалт, ХКД 473, OMS 3031, DOWCO 473).
Химическое название - N-(3,5-дихлор-4-(1,1,2,2-
тетрафторэтоксифенил)амино)-карбонил-2,6-дифторбензамид, порошок
белого цвета без запаха, температура плавления 202 - 206 °C,
-9 -12
упругость пара 5,87 x 10 Па, 298 °K (44,03 x 10 мм рт. ст.),
-6
летучесть паров 1,09 x 10 мг/куб. м, растворимость (г/л при
-5
18 °C) в воде - 2,7 x 10 , ацетоне > 100, толуоле - 6,4,
метаноле - 11,3, ксилоле - 5,2, дихлорметане - 14,6, этилацетате >
100, пропаноле - 3.
2. Методика определения гексафлумурона
в воде, почве, картофеле, ботве
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении пестицида из анализируемого объекта этанолом, реэкстракции гексафлумурона из водно-спиртового раствора в гексан с последующей очисткой экстракта на колонке с силикагелем и идентификации препарата способом газовой хроматографии.
Газохроматографическое определение проводят с детектором по захвату электронов, на фазе QF-1 - 10% (OV-210) при t кол. 150 °C.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Нижний предел обнаружения - 1 нг.
Метрологическая характеристика определения сонета в воде, почве, картофеле, ботве приведена в таблице 1.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОНЕТА
В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КАРТОФЕЛЕ, БОТВЕ
-------------T-----------T------------T-------------T------------T-------------¬
¦Определяемое¦Исследуемый¦ Нижний ¦ Размах ¦ Среднее ¦Относительное¦
¦ вещество ¦ объект ¦ предел ¦варьирования,¦ значение ¦ стандартное ¦
¦ ¦ ¦обнаружения,¦ % ¦определения,¦ отклонение, ¦
¦ ¦ ¦ мг/кг, ГЖХ ¦ ¦ % ¦ +/- % ¦
+------------+-----------+------------+-------------+------------+-------------+
¦Сонет ¦вода ¦0,005 ¦80 - 100 ¦86 ¦9,1 ¦
¦ ¦почва ¦0,01 ¦75 - 100 ¦91 ¦9,6 ¦
¦ ¦картофель ¦0,005 ¦80 - 100 ¦92 ¦8,7 ¦
¦ ¦ботва ¦0,01 ¦75 - 100 ¦91 ¦10,4 ¦
L------------+-----------+------------+-------------+------------+--------------
2.1.3. Избирательность метода
Метод избирателен в присутствии производных циклопарафинов, альфа-, гамма-, бета-ГХЦГ. На других фазах определению могут мешать изомеры-ГХЦГ.
2.2. Реактивы и материалы
Этанол, 96%, ГОСТ 5962-81.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
Толуол, чда, ГОСТ 5789-78.
Этилацетат, ч, ГОСТ 22300-76.
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-82.
Хлорид натрия, ч, ГОСТ 4233-77.
Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Силикагель Л 40/100 м для колоночной хроматографии (Чехословакия).
Вода дистиллированная.
Фильтры МРТУ 6-09-2411-65.
Фаза неподвижная: трифторпропилметилсиликоновый каучук QF-1 (OV-210).
Носитель инертный: Инертон-Супер 0,125 - 0,160 мм.
Азот газообразный осч, ГОСТ 9293-74.
Основной стандартный раствор (ОСР) гексафлумурона с концентрацией 100 мкг/мл готовят взятием навески 5 мг (0,005 г) хч вещества, перенесением в мерную колбу объемом 50 мл, прибавлением 10 мл ацетона и доведением н-гексаном до метки. Устойчив при хранении в течение 3-х месяцев.
Рабочий стандартный раствор 1 гексафлумурона (РСР 1) готовят внесением 2,5 мл ОСР в мерную колбу емкостью 25 мл и доведением н-гексаном до метки. Концентрация сонета 10 мкг/мл.
Рабочий стандартный раствор 2 гексафлумурона готовят внесением 1 мл РСР 1 в мерную колбу емкостью 10 мл и доведением н-гексаном до метки. Концентрация сонета 1 мкг/мл.
Растворы устойчивы в холодильнике в течение 10 дней.
2.3. Приборы и посуда
Газовый хроматограф "Цвет-164" с детектором постоянной скорости рекомбинации (возможно использование другого прибора с одним из вариантов электронозахватного детектора).
Вытяжной шкаф.
Холодильник.
Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Аппарат для встряхивания АВУ-60, ТУ 64-1-2451-78.
Воронки делительные на 500 - 1000 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронки конические, диаметр 3 и 5 см, ГОСТ 25336-82.
Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-80.
Колбы Бунзена, ГОСТ 25336-82.
Колбы конические, ГОСТ 25336-82, с притертой пробкой на 50 мл, 100 мл, 250 мл, ГОСТ 9737-70.
Пипетки 0,1; 1; 5 мл, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные 10 и 50 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на шлифе 50 мл, ГОСТ 9737-70.
Пробирки мерные - цена деления 0,1 мл, ГОСТ 1770-74.
Колонки для адсорбционной хроматографии размером 500 x 15 мм.
Колбы мерные вместимостью 10 мл, 25 мл, 50 мл, ГОСТ 1770-74.
Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2.833.024.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Отбор проб
Отбор, хранение и доставка проб производятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, N 2051-79 от 21.08.79.
2.4.2. Приготовление хроматографической колонки для газожидкостной хроматографии
Для приготовления 20 г набивки, содержащей 10% QF-1 на Инертоне-Супер (0,125 - 0,160 мм), взвешивают в бюксе 2 г жидкой фазы QF-1 (OV-210), которые растворяют в 40 мл ацетона.
Полученную смесь выливают в круглодонную колбу на шлифе емкостью 500 мл, содержащую 18 г носителя. Тщательно перемешивают, оставляют на ночь, закрыв плотно пробкой. Затем осторожно упаривают на ротационном испарителе до исчезновения запаха ацетона. Затем помещают в сушильный шкаф на 2 - 3 часа при t = 100 +/- 5 °C.
Стеклянную хроматографическую колонку, предварительно промытую хромовой смесью, дистиллированной водой, этанолом и диэтиловым эфиром, высушенную досуха и содержащую прокладку из стекловаты, наполняют носителем и устанавливают в термостат колонки. Термостатируют колонку в течение 12 - 18 часов при 200 - 220 °C и слабом потоке газа-носителя, не подсоединяя к детектору. После продувки колонку присоединяют к детектору.
2.5. Описание определения
2.5.1. Экстракция
Вода. К 200 мл воды добавляют 5 г NaCl, перемешивают и экстрагируют гексафлумурон в делительной воронке н-гексаном трижды, порциями по 30 - 50 мл, встряхивая воронку в течение 3 мин. Гексановые экстракты объединяют, фильтруют через воронку со слоем безводного сернокислого натрия. Воронку готовят следующим образом: в нижнюю суживающуюся часть воронки (d = 5 см) закладывают тампон из белой ваты (50 мг) и насыпают слой безводного сернокислого натрия - 1,5 см. После окончания фильтрации воронку промывают 6 мл гексана и концентрируют на ротационном испарителе под вакуумом при 45 °C досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл н-гексана и вводят в хроматограф 3 - 5 мкл.
Почва. К 100 г воздушно-сухой почвы добавляют 10 мл воды, хорошо перемешивают и заливают 100 мл этанола. Гексафлумурон экстрагируют из почвы в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Экстракт фильтруют с отсасыванием в колбу Бунзена через воронку Бюхнера с плотным фильтром, применяя вакуум. Повторяют экстракцию 40 мл этанола в течение 30 мин. Промывают остаток этанолом и объединяют экстракты.
Объединенные этанольные экстракты сливают в делительную воронку, добавляют 100 мл 5-процентного водного раствора хлорида натрия (NaCl). Гексафлумурон реэкстрагируют из этой смеси 3 раза гексаном по 3 минуты, используя каждый раз по 30 мл гексана. Гексановые экстракты объединяют, фильтруют через воронку со слоем сернокислого натрия (см. воду), концентрируют на ротационном испарителе досуха. Далее очистка, как описано ниже (см. очистку экстрактов от коэкстрактивных веществ).
Картофель, ботва. Для исследования отбирают средний образец продукта, тщательно измельчают. Для анализа используют навеску в 20 г. Исследуемый образец помещают в колбу с притертой пробкой и заливают 60 мл этанола. Экстракцию гексафлумурона проводят на шутель-аппарате в течение 1 часа. Экстракты фильтруют, применяя вакуум. Экстракцию повторяют и далее проводят определение, как описано выше для почвы.
2.5.2. Очистка экстрактов от коэкстрактивных веществ
В адсорбционную хроматографическую колонку помещают небольшой ватный тампон, затем насыпают 1 см безводного сернокислого натрия, 3 г (5 см) силикагеля Л 40/100 м для колоночной хроматографии, снова слой 1 см безводного сернокислого натрия. Промывают колонку 50 мл гексана, затем 10 мл толуола. Сухой остаток экстракта в колбе смывают дважды 2 мл толуола и переносят в колонку. Добавляют в колонку 10 мл толуола и вытекающий элюат отбрасывают. В колонку добавляют 40 мл 1-процентного раствора этилацетата в толуоле. Первые 10 мл элюата отбрасывают. Следующие 25 мл отбирают в круглодонную колбу. Элюат отгоняют на ротационном испарителе до объема 0,2 - 0,3 мл и упаривают досуха в токе азота или воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и используют для ГЖХ-анализа.
2.5.3. Определение газожидкостной хроматографией
Хроматограф марки "Цвет" с детектором по захвату электронов.
Колонка стеклянная спиральная, длина 1 м, диаметр 3 мм, заполненная фазой 10% QF-1 на Инертоне-Супер (0,125 - 0,16 мм) (OV-210).
-12
Рабочая шкала электрометра 20 x 10 А.
Скорость протяжения диаграммной ленты 240 мм/час.
Расход газа-носителя - азота 60 мл/мин.
Температура термостата колонки - 150 °C.
Температура испарителя 170 °C.
Температура термостата детектора 200 °C.
Вводимый объем - 3 мкл.
Время удерживания: в указанных условиях препарат дает два
пика: I - t = 4,7; II - t = 11,5 мин.
уд удер
Для количественного определения измеряют площадь двух пиков в пробе и в стандарте (пики должны быть близки по величине).
Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом. Для этого до и после анализа проб вводят в хроматограф по 3 - 5 мкл рабочих растворов 2 и вычисляют среднее арифметическое из 5 определений. Если при введении в хроматограф аликвотной части (3 - 5 мкл) конечного экстракта пробы получают слишком большие пики или происходит зашкаливание, пробу разбавляют н-гексаном.
Обработку результатов анализа проводят по следующей формуле.
Содержание сонета в пробе рассчитывают по формуле:
C x V x H x V
ст ст пр общ
X = ----------------------,
H x V x P
ст пр
где:
X - количество препарата в пробе (мг/кг);
C - количество пестицида в хроматографируемом объеме
ст
стандартного раствора, нг;
V - объем стандарта, введенного в хроматограф, мкл;
ст
V - объем экстракта анализируемой пробы, введенный в
пр
хроматограф, мкл;
V - общий объем экстракта анализируемой пробы, мкл;
общ
H - высота (площадь) пика исследуемой пробы, мм (кв. мм);
пр
P - навеска анализируемой пробы, г;
H - высота (площадь) пика стандарта, мм (кв. мм).
ст
3. Техника безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.