"приготовление проб с имитаторами патогенных биологических агентов. методические указания. му 4.2.1103-02"(утв. главным государственным санитарным врачом рф 27.01.2002)
УТВЕРЖДАЮ
Главный
государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый
заместитель
Министра
здравоохранения
Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
27 января 2002
года
Дата введения -
1 апреля 2002
года
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ
ФАКТОРЫ
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРОБ
С
ИМИТАТОРАМИ ПАТОГЕННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ
АГЕНТОВ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ
4.2.1103-02
1. Разработаны Федеральным центром
госсанэпиднадзора Минздрава России,
Волгоградским научно-исследовательским
противочумным институтом Минздрава России,
Омской медицинской академией и Омским
научно-исследовательским институтом
природно-очаговых инфекций Минздрава
России, Научно-исследовательским
институтом эпидемиологии и микробиологии
РАМН.
2. Утверждены Главным
государственным санитарным врачом
Российской Федерации - Первым заместителем
Министра здравоохранения Российской
Федерации 27 января 2002 г.
3. Введены в
действие с 1 апреля 2002 г.
4. Введены
взамен Методических рекомендаций
"Приготовление проб с имитатором
биологических поражающих агентов (БПА)",
утвержденных Минздравом РСФСР 27.11.90.
1.
Общие положения и область применения
1.1.
Методические указания устанавливают
требования к приготовлению проб с
применением имитаторов патогенных
биологических агентов.
1.2. Методические
указания предназначены для учреждений
санитарно-эпидемиологической службы
Российской Федерации и других учреждений,
проводящих в Системе наблюдения и
лабораторного контроля индикацию
патогенных биологических агентов и
лабораторный контроль продовольствия на
зараженность возбудителями опасных
инфекционных заболеваний и токсинами с
применением экспрессных и ускоренных
методов исследования.
1.3. Методические
указания разработаны с целью установления
единого подхода к приготовлению проб с
учетом требований по специфической
индикации патогенных биологических
агентов. Унификация методов приготовления
проб наряду с едиными требованиями к
проведению тренировочных учений по их
индикации способствует разработке единого
подхода к оценке полученных
результатов.
2. Нормативные ссылки
2.1.
Положение о государственном
санитарно-эпидемиологическом
нормировании, утвержденное Постановлением
Правительства Российской Федерации от 24.07.00
N 554.
2.2. Положение о государственной
санитарно-эпидемиологической службе
Российской Федерации, утвержденное
Постановлением Правительства Российской
Федерации от 24.07.00 N 554.
2.3. СП 1.2.011-94
"Безопасность работы с микроорганизмами I-II
групп патогенности". Утверждены
Госкомсанэпиднадзором России 04.05.94.
2.4.
СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи
и транспортирования микроорганизмов I-IV
групп патогенности". Утверждены
Госкомсанэпиднадзором России 28.08.95.
2.5.
СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV группы патогенности и
гельминтами". Утверждены Минздравом России
03.02.99.
2.6. Методическое пособие для
врачей-эпидемиологов и микробиологов.
Бактериологическая разведка и индикация
бактерийных (биологических) средств.
Утверждено Минздравом СССР 16.04.70.
2.7.
Дополнение к методическому пособию
"Документация, используемая при проведении
специфической индикации биологических
поражающих агентов". Утверждено Минздравом
СССР 26.08.81.
2.8. Инструкция по
лабораторному контролю продовольствия на
зараженность возбудителями опасных
инфекционных заболеваний и токсинами.
Утверждена Минздравом СССР, 1983.
2.9.
Методические указания по подготовке и
применению имитаторов биологических
агентов с целью проверки готовности
учреждений санэпидслужбы к работе по
специфической индикации и лабораторному
контролю. Утверждены Минздравом СССР
02.04.86.
2.10. Руководство по индикации и
идентификации бактериальных
(биологических) средств. Минобороны СССР,
1989.
2.11. Отраслевой стандарт 91500.05.001-00.
Стандарты качества лекарственных средств.
Основные положения. Утвержден Минздравом
РФ 29.02.00 N 82.
2.12. Письмо Минздрава России
от 24.02.00 N 1100/474-0-113.
3. Термины и определения
<*>
------------------------------------
<*> В
скобках в конце определения указан номер
нормативной ссылки, в которой имеется
определение.
3.1. Патогенные биологические
агенты (ПБА) - патогенные для человека
микроорганизмы (бактерии, вирусы, хламидии,
риккетсии, простейшие, грибы, микоплазмы),
генно-инженерно-модифицированные
микроорганизмы, яды биологического
происхождения (токсины), гельминты, а также
материал (включая кровь, другие
биологические жидкости и экскреты
организма), подозрительные на содержание
перечисленных агентов (2.5.).
3.2.
Специфическая индикация - комплекс
специальных мероприятий, проводимых для
подтверждения факта применения
бактериальных (биологических) средств,
выявления и определения вида ПБА в
исследуемых пробах (2.10.).
3.3. Экспрессный
метод исследования - непосредственное (без
накопления) исследование нативного
материала, проб (2.6.).
3.4. Ускоренный метод
исследования - исследование мазков, взвесей
после предварительного биологического
накопления на питательных средах, культуре
клеток, биопробных животных, эмбрионах
(2.6.).
3.5. Медицинские
иммунобиологические препараты (МИБП) -
лекарственные средства, предназначенные
для иммунологической профилактики,
иммунологической диагностики и
иммунологической терапии (2.11.).
3.6.
Вакцины - препараты, получаемые из живых
аттенуированных штаммов или убитых культур
микроорганизмов или их антигенов,
предназначенные для активной иммунизации
(2.11.).
3.7. Диагностические
иммунобиологические препараты - препараты,
предназначенные для диагностики
инфекционных заболеваний (2.11.).
3.8.
Коммерческие иммунобиологические
препараты - МИБП, реализация которых в
соответствии с требованиями письма
Минздрава России (2.12.) проводится при
наличии документов:
- свидетельства о
регистрации препарата;
- сертификата
(паспорта) фирмы-изготовителя на данную
серию;
- сертификата производства
(прежнее название - сертификат качества)
иммунобиологического препарата, выданного
ГИСК им. Л.А.Тарасевича.
3.9. Имитаторы
ПБА:
- вакцинные штаммы некоторых
возбудителей инфекционных заболеваний I-II
группы патогенности;
- диагностикумы,
содержащие корпускулярные и(или)
растворимые антигены микроорганизмов;
-
штаммы, которые обладают всеми признаками
микроорганизмов II группы патогенности, но
не имеют патогенных свойств, в связи с чем
отнесены к III или IV группе (например - V.cholerae
О1 нетоксигенный);
- безопасные в работе
токсины.
3.10. Проба с имитаторами ПБА
(далее - проба) - образец материала для
исследования, в который с учетом требований
настоящего и других действующих документов
добавлены имитаторы ПБА из числа
перечисленных в п. 3.9., в целях проведения
внешне- и внутрилабораторного контроля
готовности учреждений (лабораторий) к
проведению специфической индикации этих
агентов и контроля продовольствия на
зараженность возбудителями опасных
инфекционных заболеваний и токсинами.
4.
Требования по конструированию проб
4.1.
Пробы могут содержать один и более
различных агентов, в т.ч. и не относящихся к
имитаторам ПБА, в следующих сочетаниях:
- один имитатор ПБА;
- два и более
имитаторов ПБА (миксты);
- один или более
ПБА из группы имитаторов и один или более
ПБА IV группы патогенности
(условно-патогенных микроорганизмов);
-
один или более ПБА IV группы патогенности
(без имитаторов).
Применение проб без
ПБА (стерильных) нецелесообразно.
4.2. При
осуществлении контроля за готовностью
лабораторий к проведению специфической
индикации ПБА или лабораторному контролю
продовольствия на зараженность
возбудителями опасных инфекционных
заболеваний и токсинами в качестве
имитаторов ПБА должны использоваться
коммерческие вакцины, токсины и другие
препараты, для индикации которых имеются
коммерческие диагностические препараты.
Для научно-исследовательских целей
(отработка новых методов индикации ПБА и
других), учебных и иных специальных задач
могут использоваться имитаторы ПБА, не
обязательно отвечающие требованиям,
изложенным в п. 3.8. Перечень некоторых
препаратов, которые могут быть
использованы в качестве имитаторов ПБА,
представлен в Прилож. 3, куда включено 16
препаратов. По мере увеличения выпуска
коммерческих МИБП, в т.ч. диагностических
препаратов для проведения
иммуноферментного анализа, ДНК-диагностики
и других методов исследования, перечень
имитаторов ПБА может быть расширен.
4.3.
Условно-патогенные микроорганизмы в связи
с отсутствием соответствующих
коммерческих диагностических препаратов
не подлежат идентификации в сроки,
необходимые для проведения экспрессного и
ускоренного анализа. Они являются "фоном"
для имитаторов ПБА, имеющим большое
значение, поскольку в реальности
практически все пробы из объектов
окружающей среды и многие пробы
биологического материала, поступающие на
исследование, содержат те или иные
микроорганизмы (сапрофитные,
условно-патогенные и другие). В пробы,
которые в нормальных условиях не должны
содержать условно-патогенные
микроорганизмы или их антигены (кровь и
некоторые другие биологические субстанции,
консервированные пищевые продукты), эти
микроорганизмы могут не добавляться.
4.4.
В качестве "фона" можно использовать такие
микроорганизмы, как Е.coli, St.aureus, St.epidermidis,
В.cereus, Y.enterocolitica, Ps.aeruginosa и другие. Выбранные
штаммы этих микроорганизмов должны
отвечать следующим требованиям:
- не
проявлять антагонистического (например,
колициногенного) действия по отношению к
жизнеспособным микроорганизмам -
имитаторам ПБА;
- формировать на простых
питательных средах, не содержащих
ингибиторы роста, зрелые колонии в течение
18-24 часов. Такие колонии служат в
определенной степени ориентиром для
обнаружения под микроскопом на поверхности
пластинки агара мельчайших колоний
микроорганизмов, обладающих замедленным
ростом (возбудителя чумы, бруцелл и
других);
- не иметь или иметь слабую и
замедленную подвижность на простых
питательных средах, не содержащих
ингибиторы подвижного (ползучего) роста.
Не рекомендуется использовать в качестве
"фона" культуру Y.pseudotuberculosis в пробах,
содержащих в качестве имитатора вакцинный
штамм Y.pestis, в связи с трудностями их
дифференциации экспрессными методами.
4.5. В качестве фона может рассматриваться и
V.cholerae не О1 и не О139, т.к. коммерческие
препараты для обнаружения возбудителя в
МФА и РНГА не выпускаются. Однако данные
микроорганизмы для отдельных задач можно
считать имитатором ПБА, поскольку
классический метод исследования с
использованием сред накопления без
ингибиторов роста (без теллурита калия)
позволяет лабораториям, не имеющим
возможности проводить экспрессное
исследование, выдать тем не менее
окончательный ответ о выделении культуры
этого микроорганизма в сроки, необходимые
для обнаружения других имитаторов ПБА.
4.6. Допускается использование в качестве
"фона" смывов с
каких-либо объектов
окружающей среды, проверенных на
содержание в
них микроорганизмов.
Смывы получают с нескольких участков
поверхности, каждый раз ополаскивая
тампон в физиологическом
растворе до
получения значительной мутности. На 5 мл
пробы
добавляют 2 капли такой взвеси.
Т.к. объекты окружающей среды
подвергаются многим внешним влияниям,
смывы с них, несмотря на
проверку, не
гарантируют стабильности результатов.
Поэтому более
предпочтительным
является дозированное внесение
отобранных
условно-патогенных
микроорганизмов из взвеси, приготовленной
по
9
стандартному образцу мутности 10 единиц (10
для кишечной палочки)
8
или 5 единиц (5 х 10 ). Фактическое количество
микробных клеток в
такой взвеси для
мелких микроорганизмов может быть более
высоким,
9
а для
крупных - меньшим, чем 10 . Примерное
содержание различных
микроорганизмов
во взвеси представлено в
таблице.
ПРИМЕРНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ,
СООТВЕТСТВУЮЩЕЕ
СТАНДАРТУ МУТНОСТИ 5 И 10
ЕДИНИЦ
----T----------------------T-----------T-------------------------¬
¦ N ¦ Наименование ¦Соотношение¦ Число
микробных клеток ¦
¦п/п¦
микроорганизма ¦ размера с ¦ по стандарту
мутности ¦
¦ ¦ ¦ кишечной
+------------T------------+
¦ ¦ ¦
палочкой ¦ 5 единиц ¦ 10 единиц ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 8 ¦ 9 ¦
¦1
¦E.coli ¦Х ¦5,0 x 10 ¦10 ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 8 ¦ 9 ¦
¦2
¦St.aureus ¦1,0 ¦5,0 x 10 ¦10 ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 8 ¦ 9 ¦
¦3
¦Y.pestis ¦1,0 ¦5,0 x 10 ¦10 ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 8 ¦ 9 ¦
¦4
¦Вас.anthracis - споры ¦1,0 ¦5,0 x 10 ¦10 ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 7 ¦ 8 ¦
¦5
¦Вас.anthracis ¦10,0 ¦5,0 x 10 ¦10 ¦
¦
¦(вегетативная форма) ¦ ¦ ¦
¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 7 ¦ 8 ¦
¦6
¦Вас.cereus ¦10,0 ¦5,0 x 10 ¦10 ¦
¦
¦(вегетативная форма) ¦ ¦ ¦
¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 9 ¦ 9 ¦
¦7
¦V.cholerae ¦0,5 ¦10 ¦2,0 x 10 ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 8 ¦ 9 ¦
¦8
¦Br.abortus ¦0,6 ¦8,0 x 10 ¦1,6 x 10 ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
¦ ¦ ¦ 9 ¦ 9 ¦
¦9
¦Fr.tularensis ¦0,2 ¦2,5 x 10 ¦5,0 x 10 ¦
+---+----------------------+-----------+------------+------------+
¦
