"лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов. методические указания. мук 4.2.1887-04"(утв. главным государственным санитарным врачом рф 04.03.2004)
¦ I ¦0,12-1¦ - ¦ - ¦ 16 ¦ 0,5-1 ¦ - ¦ 4-16
¦
+----------------+------+-----+------+------+-------+-----+------+
¦
R ¦ >2 ¦ - ¦ - ¦ >32 ¦ >2 ¦ >4 ¦ >32
¦
L----------------+------+-----+------+------+-------+-----+-------
Обозначения:
S - чувствительные, I - умеренно резистентные,
R-резистентные; PG - бензилпенициллин, СТ -
цефотаксим, СТХ - цефтриаксон, CL -
хлорамфеникол, DC - доксициклин, RI -
рифампицин, TS - триметоприм.
8.2.
Пневмококковые менингиты.
8.2.1.
Характеристика возбудителя.
Возбудителем пневмококковых менингитов
является Streptococcus pneumoniae или пневмококк,
который (согласно "Определителя бактерий
Берджи") входит в состав рода Streptococcus (группа
стрептококков ротовой полости), включенных
в 17-ю группу "Грамположительные кокки".
Это овальные, иногда вытянутые вдоль оси
ланцетовидные кокки, диаметром 0,5-1,0 мкм,
располагаются парами и окружены общей
капсулой.
Строение клеточной стенки
пневмококков типично для
грамположительных бактерий. Ее основой
является пептидогликан со встроенными
углеводами, тейхоевыми кислотами,
липопротеинами и поверхностными белками.
Пневмококки неподвижны, спор не образуют,
являются факультативными анаэробами,
хемоорганотрофы. Для культивирования
пневмококки нуждаются в богатых
питательных средах, предпочитают
капнофильные условия (5-10% CO2). Температурный
оптимум 37 град. C. Каталазоотрицательны.
На плотных питательных средах растут в виде
мелких, прозрачных, не склонных к слиянию
колоний. На средах с кровью колонии
пневмококков окружены зоной альфа -
гемолиза (по классификации Браун)
серовато-зеленого цвета, вследствие
разрушения эритроцитов и превращения
гемоглобина в метгемоглобин. Колонии
склонны к аутолизу, что связано с
активностью внутриклеточных ферментов.
Капсулы пневмококков являются основным
фактором вирулентности, защищающим микроб
от опсонизации и последующего фагоцитоза.
Некапсулированные штаммы авирулентны.
Среди других факторов патогенности
наибольшее значение имеет уровень
активности гиалуронидазы, пневмолизина,
гемолизина и др.
На выявлении
специфического набухания капсулы
возбудителя основана экспресс-диагностика
пневмококков в патологическом материале с
использованием поливалентной иммунной
сыворотки (реакция Нейфельда). После
нанесения поливалентной сыворотки на
исследуемый материал, при микроскопии
отмечают значительное увеличение капсулы
пневмококков по сравнению с контролем.
По капсульному антигену также проводят
типоспецифическую дифференцировку
пневмококков, которых насчитывают не менее
90 серотипов. Серотиповой пейзаж
возбудителя зависит от географической
области, климатических условий, возраста
больных, вида патологии и со временем может
меняться. Выявление особенностей
циркуляции пневмококков позволяет
значительно снизить заболеваемость
пневмококковой инфекцией за счет
вакцинопрофилактики групп риска.
8.2.2.
Лабораторная диагностика.
Диагностику
пневмококковых менингитов проводят
согласно общей схемы исследования
материала при бактериальных менингитах.
Идентификацию пневмококков выполняют по
следующим тестам:
- обнаружение в
нативном материале (ликвор и/или кровь)
диплококков, окруженных капсулой;
- рост
на средах, содержащих кровь с образованием
альфа-гемолиза;
- характерная
морфология культурального мазка по
Граму;
- положительная проба с
оптохином;
- чувствительность к желчным
кислотам;
- выявление специфического
антигена в реакции латекс-агглютинации
(экспресс-метод).
При бактериоскопии
нативного ликвора или препарата крови
"толстая капля" (окраска водно-спиртовым
раствором метиленовой сини) обнаруживают
овальные или ланцетовидные диплококки,
окруженные капсулой, которые могут
образовывать короткие цепочки. Капсула
хорошо заметна на окрашенном фоне,
выделяясь более светлым цветом. У больных,
получавших антибиотики, типичная
морфология пневмококка теряется, капсула
истончается и малозаметна. В начальной
стадии пневмококкового менингита в ликворе
можно наблюдать значительное количество
микробных клеток при небольшом количестве
клеточных элементов воспаления
(сегментоядерные лейкоциты).
При посеве
на питательные среды и дальнейшей
инкубации в течение 24 часов при 37 град. C в
атмосфере 5-10% CO2 с повышенной влажностью
выявляют следующие тинкториальные
свойства:
- на жидких и полужидких
питательных средах (0,1% сывороточный агар)
пневмококки растут в верхней части
столбика среды, с постепенным диффузным
помутнением всего объема. При длительной
инкубации выпадает хлопьевидный осадок;
- на "двухфазной" питательной среде
отмечают помутнение жидкой среды и рост
мелких прозрачных колоний на границе
"жидкой" и "плотной" фазы;
- на плотных
питательных средах пневмококки растут в
виде нежных мелких прозрачных колоний. Для
R-форм характерны сферические колонии с
неровными краями. Иногда встречают
слизистые (М-формы) колонии, особенно у
серотипов пневмококка 3, 37. Просмотр чашек
ведут визуально и с помощью лупы.
Сывороточный агар - мелкие (диаметром до 1
мм) прозрачные, плоские колонии с
центральным углублением. "Шоколадный" агар -
мелкие прозрачные колонии, окруженные
зоной желто-зелен
