"методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. методические указания. мук 4.2.577-96"(утв. госкомсанэпиднадзором рф 29.10.1996)

г
Натрий фосфорно - кислый двузамещенный - 7 г
Натрий фосфорно - кислый однозамещенный - 3 г
Лактоза - 4 г
Дистиллированная вода - 1000,0 куб. см
--------------------------------
<*> - При использовании среды двойной концентрации масса (объем) всех ингредиентов, кроме воды, удваивается.
Среду готовят из 2 основных растворов. Прежде всего экспериментально определяют точную пропорцию двузамещенного и однозамещенного фосфата натрия, которая с используемым образцом пептона и кислого селенисто - кислого натрия дает активную кислотность (7,0 +/- 0,1) ед. pH, что регулируется соотношением фосфатов. Такая предварительная подтитровка производится всякий раз, когда меняется серия любого из входящих в среду основных ингредиентов (пептон, кислый селенисто - кислый натрий, фосфаты).
После установления указанных соотношений к приготовленному раствору фосфатов добавляют пептон и лактозу, разливают во флаконы и стерилизуют текучим паром 2 дня по (30 +/- 1) мин. или при (112 +/- 1) град. С однократно в течение (30 +/- 1) мин.
Отдельно на стерильной воде асептически готовят 10-процентный раствор кислого селенита натрия. Перед началом работы на каждый флакон с 50,0 куб. см основного раствора добавляют 2,0 куб. см раствора кислого селенита натрия. Приготовленную среду разливают в необходимых количествах в стерильные пробирки или колбы, плотно закрывают приготовленными пробками.
6.2.3.5.2. Селенитовая среда сухая
Селенитовую среду приготавливают согласно прописи на этикетке.
6.2.3.6. Среды Плоскирева и висмут - сульфитный агар
Среды Плоскирева и висмут - сульфитный агар (ВСА) промышленного производства выпускаются в сухом виде. Их следует готовить согласно прописи, указанной на этикетке банки. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить и холодильнике до 10 суток.
6.2.3.7. Трехсахарный агар с мочевиной (среда Олькеницкого)
Трехсахарный агар с мочевиной готовят смешением следующих ингредиентов:
Дистиллированная вода - 100,0 куб. см
Сухой питательный агар - 2,5 г
Лактоза - 1,0 г
Сахароза - 1,0 г
Глюкоза - 0,1 г
Мочевина - 1,0 г
Железо серно - кислое (FeSO4 7H2O) - 0,02 г
Натрий серноватисто - кислый
(Na2S2O3 x 5H2O) - 0,03 г
0,04-процентный водный раствор фенолового
красного - 0,04 куб. см
Тщательно перемешивают и устанавливают активную кислотность (7,3 +/- 0,1) ед. pH. Разливают в пробирки по 5,0 куб. см и стерилизуют текучим паром по 20 мин. 3 дня подряд. После стерилизации среду скашивают таким образом, чтобы высота столбика была не менее 3 см. Готовая среда имеет бледно - розовый цвет.
6.2.3.8. 0,4-процентный водный раствор фенолового красного
Взвешивают 0,1 г индикатора фенолового красного, вносят в колбу, вместимостью 50 куб. см, и вливают 25,0 куб. см дистиллированной воды. Тщательно перемешивают до полного растворения. Раствор хранят в холодильнике до 7 суток.
Для получения 0,04-процентного рабочего раствора индикатора 1,0 куб. см 0,4-процентного раствора смешивают с 9,0 куб. см дистиллированной воды.
6.2.3.9. Среда Ресселя из сухих питательных сред
К 950,0 куб. см дистиллированной воды добавляют 40 г сухого питательного агара с лактозой и индикатором ВР и 5 г питательного агара. Смесь растворяют при нагревании до кипения. Затем в 50,0 куб. см дистиллированной воды растворяют 1 г химически чистой глюкозы и добавляют к приготовленной смеси.
Разливают в стерильные пробирки по 5,0 - 6,0 куб. см и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по (30 +/- 1) мин. или однократно при (111 +/- 1) град. С в течение (30 +/- 1) мин. Среду скашивают так, чтобы остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).
6.2.3.10. Среда Клиглера из сухих питательных сред
Среду готовят и стерилизуют согласно прописи на этикетке. Готовую среду скашивают в пробирках так, чтобы остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).
6.2.3.11. Диагностическая поливалентная агглютинирующая адсорбированная сальмонеллезная сыворотка.
Необходимые разведения сыворотки готовят перед использованием согласно прилагаемой к коробке инструкции.
6.2.4. Среды и реактивы для обнаружения стафилококков
6.2.4.1. Солевой бульон
К 100,0 куб. см мясо - пептопного бульона (МПБ) с активной кислотностью (7,3 +/- 0,1) ед. pH в колбе, вместимостью 200 куб. см, добавляют 6,5 г хлористого натрия и разливают в пробирки по 10,0 куб. см. Стерилизуют в автоклаве при (121 +/- 1) град. С в течение (20 +/- 1) мин.
6.2.4.2. Бульон солевой и агар солевой - сухая питательная основа для приготовления желточно - солевого или молочно - солевого агара - промышленного производства. Подготовку сред для посевов проводят согласно прописи на этикетке.
6.2.4.3. Агар типа Байрд - Паркер
Основа среды: 30 г сухого питательного агара на основе ферментативного гидролизата кормовых дрожжей размешивают в 1,0 куб. дм дистиллированной воды, добавляют 10 г пирувата натрия, 5 г хлористого лития, тщательно перемешивают. Смесь нагревают при помешивании и кипятят в течение 1 минуты до полного растворения ингредиентов. Устанавливают активную кислотность (7,1 +/- 0,1) ед. pH. Разливают во флаконы объемами 100 - 200 - 300 куб. см в зависимости от потребности и стерилизуют при (121 +/- 1) град. С в течение (15 +/- 1) мин. Основа среды может храниться в течение месяца в условиях холодильника. Перед употреблением в растопленную и охлажденную (45 - 50) град. С основу, с соблюдением правил асептики прибавляют (из расчета на 100,0 куб. см среды) 0,5 см 2-процентного раствора теллурита калия и 5,0 куб. см эмульсии яичного желтка. Среду тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, в объеме, не менее 20,0 куб. см на чашку. Чашки со средой могут быть использованы в течение 24 - 48 часов. Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате общепринятым способом.
6.2.4.4. Агар типа Байрд - Паркера - арбитражная среда промышленного производства в сухом виде
6.2.4.5. Желточно - солевой агар (ЖСА)
Основа - солевой агар: к мясо - пептонному бульону (МПБ) с активной кислотностью (7,3 +/- 0,1) ед. pH добавляют 2% агара и 6,5% хлористого натрия, расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через ватно - марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по 100,0 куб. см в колбы, вместимостью 250 куб. см, и стерилизуют при (121 +/- 1) град. С в течение (3 +/- 1) мин. Вместо мясо - пептонного бульона можно использовать сухой питательный агар на основе килечного гидролизата, приготовленный по прописи на этикетке.
ЖСА: на 100,0 куб. см стерильного расплавленного и остуженного до (45 +/- 1) град. С солевого агара добавляют 20,0 куб. см эмульсии яичного желтка. После полного размешивания желточно - солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20,0 - 25,0 куб. см и хранят в холодильнике до 5 - 7 дней.
6.2.4.6. Эмульсия яичного желтка
На дно стерильной чашки Петри помещают куриное яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной этиловым спиртом. Стерильным пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу, вместимостью 200 куб. см. К желтку постепенно добавляют (частями по 20,0 - 30,0 куб. см) 50,0 куб. см стерильного физиологического раствора, затем содержимое тщательно встряхивают до получения гомогенной массы.
6.2.4.7. Цитратная плазма кролика
Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед употреблением согласно прописи в прилагаемом наставлении.
6.2.5. Среды и реактивы для обнаружения B.cereus
6.2.5.1. Среда Донована
К 1,0 куб. дм расплавленного питательного или мясо - пептонного агара добавляют 2,5 г трехзамещенного цитрата натрия, 2,5 г хлористого лития, стерилизуют при (110 +/- 1) град. С в течение (30 +/- 1) мин., охлаждают до 45 - 50 град. С, добавляют 200000 ЕД полимиксина "М" и эмульсию двух желтков. Тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, которые можно хранить в холодильнике не более 7 - 10 суток.
6.2.5.2. Эмульсия яичных желтков для среды Донована
Асептически отделяют от яиц 2 желтка, как описано в п. 6.2.4.6. К желткам добавляют 100,0 куб. см стерильного физиологического раствора, тщательно встряхивают для получения гомогенной массы.
6.2.5.3. Солевой полимексиновый агар с 2,3,5 - трифенилтетразолием хлористым
К 1,0 куб. дм 2-процентного питательного или мясо - пептонного агара добавляют 60 г хлористою натрия, 200000 ЕД полимиксина "М", 0,1 - 0,2 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, эмульсию 2 желтков.
Полимиксин, 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый и эмульсию желтков асептично добавляют в агар после расплавления и охлаждения до 40 - 45 град. С, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри. Хранят среду в холодильнике не более 7 - 10 суток.
6.2.5.4. Кровяной агар
К 100,0 куб. см расплавленного и остуженного до 40 - 45 град. С с 2% мясо - пептонного агара добавляют 5,0 куб. см дефибринированной крови <*> человека, барана или кролика, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Приготовленную среду хранят в холодильнике до 5 суток.
--------------------------------
<*> - В качестве антикоагулянта применяют 5-процентный раствор лимонно - кислого натрия или 5-процентный раствор щавелево - кислого натрия (или калия). Антикоагулянт берут из расчета 1 объем на 9 объемов крови (1:9).
6.2.5.5. Среда с маннитом
В дистиллированную воду прибавляют 1% пептона и 0,5% хлористого натрия. Растворяют при нагревании, прибавляют 0,1% спиртового (1,6%) раствора бромкрезолового пурпурного (можно бромкрезолового синего), нагревают до 80 град. С и устанавливают активную кислотность (7,1 +/- 0,1) ед. pH, проверяя значение на pH-метре. Затем среду кипятят (5 +/- 1) мин., фильтруют и доливают до первоначального объема дистиллированной водой. Добавляют 0,5 - 1% маннита, разливают по пробиркам с поплавками. Стерилизуют автоклавированием при (115 +/- 1) град. С в течение (15 +/- 1) мин.
6.2.5.6. Среда с индикатором ВР и маннитом сухая промышленного производства.
Подготовку среды для посева проводят согласно прописи на этикетке.
6.2.6. Среды и реактивы для обнаружения плесневых
грибов и дрожжей
6.2.6.1. Раствор солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5 +/- 0,5)%
Сусло фильтруют через фильтрованную бумагу, разливают в колбы и стерилизуют (30 +/- 1) мин. в автоклаве при (108 +/- 2) град. С. Затем сусло декантируют. В сусле определяют массовую долю сухих веществ ареометром - сахарометром. Сусло разбавляют водой до массовой доли сухих веществ (7,5 +/- 0,5)%, разливают в колбы и стерилизуют при (116 +/- 1) град. С в течение (20 +/- 1) мин. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, которое готовят аналогично солодовому.
6.2.6.2. Сусловый агар
К 1,0 куб. дм солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5 +/- 0,5)% прибавляют 30 г агара. Среду нагревают до полного расплавления агара и фильтруют через вату или фильтровальную бумагу. Охлаждают до (50 +/- 5) град. С и устанавливают активную кислотность (3,6 +/- 0,1) ед. pH с помощью молочной кислоты. Фильтрат разливают в колбы и стерилизуют при (116 +/- 1) град. С в течение (20 +/- 1) мин.
6.2.6.3. Приготовление среды из сухого сывороточного агара "БФ"
К 1,0 куб. дм дистиллированной воды прибавляют 60 г порошка агара сывороточного "БФ", нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают активную кислотность (4,0 - 4,5) ед. pH добавлением молочной кислоты, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121 +/- 1) град. С в течение (15 +/- 1) мин.
6.2.6.4. Среда для определения дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах промышленного производства <*> по ТУ 49 1059-84.
Среда готовится по прописи на этикетке.
--------------------------------
<*> - Использование сред 6.2.6.4 - 6.2.6.6 допускается только в производственных лабораториях.
6.2.6.5. Среда Сабуро
К 1,0 куб. дм дистиллированной воды добавляют 18 г агара и оставляют на 30 мин. для его набухания, затем 40 г мальтозы или глюкозы и 10 г пептона, нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают активную кислотность (6,5 +/- 0,1) ед. pH с помощью молочной кислоты. Разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (116 +/- 1) град. С в течение (20 +/- 1) мин.
6.2.6.6. Среда с солодовым экстрактом
К 1,0 куб. дм дистиллированной воды добавляют 20 г солодового экстракта, 5 г пептона, 0,4 г лимонной кислоты, 5 г сахарозы, 18 г агара. Среду плавят в автоклаве, поднимая температуру до (120 +/- 1) град. С (без выдержки). Давлению дают упасть, расплавленную среду фильтруют через ватно - марлевый фильтр, разливают и стерилизуют при (115 +/- 1) град. С в течение (15 +/- 1) мин.
Среды хранят при температуре от 4 до 6 град. С не более 14 суток. Для повышения элективности питательных сред 6.2.6.3 - 6.2.6.6 добавляют антибиотики в объеме, указанном в табл. 10.
Антибиотики готовят согласно пп. 6.2.6.7. - 6.2.6.10.
Таблица 10
----------T------------------------------------------------------¬
¦ Объем ¦ Объем добавляемых к среде растворов антибиотиков, ¦
¦питатель-¦ куб. см ¦
¦ной среды+------------T--------------T------------T-------------+
¦ ¦ пенициллин ¦ стрептомицин ¦ неомицин ¦ левомицетин ¦
+---------+------------+--------------+------------+-------------+
¦ 980 ¦ 10 ¦ 10 ¦ - ¦ - ¦
+---------+------------+--------------+------------+-------------+
¦ 930 ¦ - ¦ - ¦ 70 ¦ - ¦
+---------+------------+--------------+------------+-------------+
¦ 975 ¦ - ¦ - ¦ - ¦ 25 ¦
L---------+------------+--------------+------------+--------------
Водные растворы антибиотиков готовят непосредственно перед использованием и вносят в расплавленную и охлажденную до (46 +/- 1) град. С питательную среду.
Среды с антибиотиками хранению не подлежат.
6.2.6.7. Приготовление раствора пенициллина
Во флакон с пенициллином, содержащим 500000 ЕД, добавляют 5 - 7 куб. см стерильной дистиллированной воды (п. 6.1.6.), тщательно перемешивают

Медицинское законодательство »