"методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. методические указания. мук 4.2.577-96"(утв. госкомсанэпиднадзором рф 29.10.1996)

ТУ 6-09-4119-75
Левомицетин (медпрепарат)
Лимонная кислота, х.ч. или ч. ГОСТ 3652-69
Литий хлористый, ч. или х.ч.,
или ч.д.а. ГОСТ 4328-77
L-цистин соляно - кислый или цистин
соляно - кислый, получаемый по импорту ТУ 6-093252-80
Магний серно - кислый, 7-водный ГОСТ 4523-77
Магний хлористый 6-водный, ч.х.ч.
или х.ч., или ч.д.а. ГОСТ 4209-77
Масло иммерсионное для микроскопии ГОСТ 13739-78
Медь серно - кислая, 5-водная, х.ч. ГОСТ 4165-78
Метиленовый голубой, индикатор,
получаемый по импорту
Молоко коровье, обезжиренное,
стерильное, приготовленное
(в пробирках) ГОСТ 9225-84
Молоко коровье, обезжиренное, сухое ГОСТ 10970-87
Мочевина (карбамид) ГОСТ 6691-77
Мясо - пептонный бульон
Набор для окраски по Граму
Натрий - аммоний фосфорно - кислый
двузамещенный, 4-водный, ч.
или х.ч. ГОСТ 4170-78
Натрия гидроокись, ч.д.а. ГОСТ 4328-77
Натрий лимонно - кислый, 5,5-водный,
ч.д.а. ГОСТ 22280-75
Натрий серноватисто - кислый (натрия
трисульфат), 5-водный ГОСТ 27068-86
Натрий хлористый, ч. или х.ч.,
или ч.д.а. ГОСТ 4233-77
Неомицин (медпрепарат)
Панкреатин медицинский, активностью
50 ЕД в 1 г ФХ 362
Пара-диметиламидобензальдегид, ч. ТУ 6-09-3272-77
Пенициллин (медпрепарат)
Пергидроль 30% (водорода перекись) ГОСТ 177-88
Пептон сухой ферментативный для
бактериологических целей ГОСТ 13805-76
Полимиксин "М" сульфат по 500000 ЕД
(медпрепарат)
Плазма крови кролика сухая
Сахароза ГОСТ 5833-75
Спирт этиловый ректификованный
технический ГОСТ 18300-87
Спирт этиловый ректификованный ГОСТ 5962-67
Соль Мора ГОСТ 4208-72
Среда с индикатором ВР и маннитом сухая
Среда агаровая модифицированная для
определения общего количества бактерий
в молоке и молочных продуктах ТУ 49513-83
Среда для определения количества
мезофильных аэробных и факультативно -
анаэробных микроорганизмов (общего
количества бактерий)
КМАФАнМ ТУ 10-02-02-789-177-94
Среда Сабуро ТУ 9229-014-004 19789-95
Среда Левина сухая ФС-42-53 ВС-88
Среда Плоскирева ФС-42-193 ВС-88
Среда Ресселя ФС-42-190 ВС-88
Среда Эндо ФС-42-186 ВС-88
Среда Клиглера ТУ 49 876-82
Среда Кесслер сухая ТУ 10.02.875-90
Среда Козера
Среда гидролизатно - молочная
(ГМС-1) для количественного учета
бифидобактерий ТУ 10-02-02-789-176-94
Среда кукурузно - лактозная (ГМК-1)
для количественного учета
бифидобактерий ТУ 10-02-02-789-176-94
Стрептомицин (медпрепарат)
Сусло солодовое неохмеленное
Сыворотка диагностическая
сальмонеллезная 0-агглютинирующая
адсорбированная ТУ 6-09-3838-78
2,3,5-трифенилтетразолий
хлористый, ч.д.а.
Феноловый красный ГОСТ 5853-51
Фенолфталеин ГОСТ 5850-72
Фуксин основной ТУ 6-09-4119-75
Хлороформ технический ГОСТ 20015-76
Экстракт кормовых дрожжей ТУ 42-14-56-76
Экстракт солодовый ГОСТ 418-84
Яйцо куриное диетическое
5. Подготовка к анализу
5.1. Подготовка проб к анализу
5.1.1. Молоко, сливки и другие жидкие
продукты и компоненты
Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.
5.1.2. Сгущенные продукты и компоненты
Отобранную пробу тщательно перемешивают стерильной ложкой, затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нее помещают 10 г продукта.
5.1.3. Кисло - молочные продукты и напитки, закваски
Отобранные пробы перед исследованием перемешивают и нейтрализуют. Для этого на каждые 10 куб. см/г исследуемого продукта или его первого разведения для сухих кисло - молочных продуктов, напитка или закваски в стерильную посуду добавляют 1,0 куб. см стерильного раствора двууглекислого натрия с массовой концентрацией 100 г/куб. дм, содержимое перемешивают.
5.1.4. Стерилизованные продукты детского питания
Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают. Перед вскрытием бутылок (пакетов) с продуктом крышку (поверхность пакета) протирают ватой, смоченной спиртом.
Открывают крышку фламбированным или стерильным консервным ножом. Края пакета вскрывают стерильным ножом, скальпелем или ножницами. После снятия крышки края бутылки вновь фламбируют.
5.1.5. Сыр, творог, творожные изделия
и пастообразные продукты
Навеску сыра, творога, творожных изделий и пастообразных продуктов взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную или фламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают, нейтрализуют по п. 5.1.3.
5.1.6. Топленое масло или молочный жир
Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре от 40 до 45 град. С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
5.1.7. Сухие продукты детского питания и компоненты
Отобранную среднюю пробу тщательно перемешивают, взвешивают навеску продукта на кусочке стерильного пергамента, на чашке Петри, в бюксе или на часовом стекле, затем взвешенную пробу переносят в стерильную колбу или другую посуду.
5.2. Приготовление разведений продуктов для посева
5.2.1. Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных растворах разбавленного фосфатного буфера, изотонического раствора натрия хлорида, пептонной воды или лимонно - кислого натрия (для сыра).
Для приготовления разведения готовят все необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9,0 куб. см или колбы с 90,0 куб. см одного из растворов, используемых дня приготовления разведений.
5.2.2. Из проб молока, сливок, кисло - молочных продуктов и напитков, кукурузного масла, молочного жира и других жидких продуктов и компонентов отбирают стерильной пипеткой 10,0 куб. см и вносят в 90,0 куб. см одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, взбалтывают в течение (4 +/- 1) мин. круговыми движениями до возможно более полного растворения. При этом пипетку промывают до 10 раз раствором этого продукта до верхнего уровня имеющихся на ней делений.
Получают разведение 1:10 (первое разведение).
Топленое масло или молочный жир вносят в растворы, подогретые до температуры от 40 до 45 град. С.
5.2.3. Приготовленные навески по 10 г сухих молочных продуктов детского питания, сывороточных белковых концентратов, казецитов и других компонентов, сгущенных продуктов, сыра, творога, творожных изделий и других пастообразных продуктов переносят в колбу с 90,0 куб. см одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, подогретых от 40 до 45 град. С и взбалтывают в течение (4 +/- 1) мин. круговыми движениями до возможно более полного эмульгирования.
Получают разведение 1:10.
При другом способе разведения к приготовленным навескам по 10 г вышеуказанных продуктов добавляют 90,0 куб. см одного из стерильных растворов, подогретых от 40 до 45 град. С и далее поступают как указано в п. 5.2.3.
5.2.4. Для получения однородной взвеси продукта допускается перемешивание на аппарате для встряхивания жидкостей в течение (6 +/- 1) мин., избегая намокания пробок. Первое разведение продукта (1:10) можно гомогенизировать в стерильном стакане гомогенизатора или растереть в стерильной ступке.
5.2.5. Из первого разведения продукта стерильной пипеткой берут 1,0 куб. см и переносят в пробирку, содержавшую 9,0 куб. см стерильного раствора, используемого для приготовления разведений, перемешивают осторожно, набирая и выдувая из пипетки 5 - 10 раз. Получают второе разведение продукта (1:100). Последующие разведения в зависимости от предполагаемого обсеменения продукта 1:1000, 1:10000 и т. д. готовят аналогично.
Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. Вводят пипетку в пробирку не более чем на 2 - 3 см ниже поверхности взвеси.
Время от момента приготовления разведений до посева не должно превышать 20 - 30 мин. Перед посевом все разведения осторожно встряхивают. При посеве на чашки Петри или в пробирки посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.
5.2.6. Для приготовления разведении сухих молочных каш для детского питания используют надосадочную жидкость первого разведения продукта после отстаивания его в течение 2 - 3 мин.
5.3. Подготовка посуды и материалов
5.3.1. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1 - 2%) в течение (15 +/- 5) мин. и затем ополаскивают дистиллированной водой.
Посуду, бывшую в употреблении, моют 0,5% щелочным раствором с помощью ершей и щеток и ополаскивают водопроводной водой. Сильно загрязненную посуду со следами жира, красок и иммерсионного масла опускают на 2 ч. в хромовую смесь, подогретую от 40 до 45 град. С, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой.
Посуда с питательными средами, после подсчета на них дрожжей, плесневых грибов, бактерий группы кишечных палочек, E.coli, S.aureus, энтерококков, сальмонелл и других видов условно - патогенных и патогенных микроорганизмов, обеззараживается перед мойкой путем стерилизации в автоклаве при (121 +/- 1) град. С в течение (30 +/- 1) мин. или кипячением в течение 1 ч.
Вымытую посуду не вытирают, а сушат при комнатной температуре или горячим воздухом.
Предметные стекла после мойки и ополаскивания вытирают чистой салфеткой или помещают в склянку с притертой пробкой в смесь этилового спирта и наркозного эфира в соотношении 1:1.
5.3.2. Лабораторную посуду перед использованием обязательно стерилизуют. Стерилизацию осуществляют сухим жаром в сушильном шкафу при (160 +/- 5) град. С в течение 2 ч или паром в автоклаве при 1 атм. (121 +/- 1) град. С в течение (30 +/- 1) мин. с последующим подсушиванием в сушильном шкафу.
Перевод давления, показываемого манометром автоклава, в температуру проводится следующим образом:
0,5 атм. - 112 град. С;
0,7 атм. - 116 град. С;
0,8 атм. - 118 град. С;
1,0 атм. - 121 град. С;
2,0 атм. - 134 град. С.
Чашки Петри, пипетки и т. п. стерилизуют завернутыми в плотную оберточную бумагу или в пеналах. В верхнюю часть пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты.
Пробирки, флаконы, бутылки, колбы закрывают ватно - марлевыми пробками. Поверх пробки (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок, который обвязывают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым колечком.
Каучуковые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют отдельно в автоклаве завернутыми в бумагу.
Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками. Срок хранения стерильной посуды - не более 30 суток при ненарушенной завертке или невскрытых пеналах.
6. Приготовление питательных сред и реактивов
6.1. Питательные среды и реактивы общего назначения
6.1.1. Концентрированный фосфатный буферный раствор
Взвешивают 34 г однозамещенного фосфорно - кислого калия и растворяют в 500,0 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе, вместимостью 1000 куб. см. Устанавливают активную кислотность раствора (7,2 +/- 0,1) ед. pH 1H раствором гидроокиси натрия и доводят дистиллированной водой до 1000,0 куб. см. Хранят в емкости, укупоренной резиновой пробкой, в условиях холодильника не более 30 суток.
6.1.2. Разбавленный фосфатный буферный раствор
Вносят пипеткой, вместимостью 2 куб. см, 1,25 куб. см концентрированного фосфатного буферного раствора в мерную колбу, вместимостью 1000 куб. см, и доводят объем дистиллированной водой до метки, проверяют активную кислотность (7,1 +/- 0,1) ед. pH.
Разливают разбавленный фосфатный буферный раствор по 10,0 куб. см в пробирки, по 100,0 куб. см в колбы, вместимостью 200 куб. см, и по 900,0 куб. см в колбы, вместимостью 1600 куб. см, закрывают ватными пробками. Стерилизуют в автоклаве при (121 +/- 1) град. С в течение (20+/- 1) мин.
6.1.3. 0,1-процентный водный раствор пептона
(пептонная вода)
К 1,0 куб. дм дистиллированной воды добавляют 1 г пептона. После размешивания среду кипятят, фильтруют и разливают в пробирки и флаконы в необходимых количествах. Стерилизует при (121 +/- 1) град. С в течение (30 +/- 1) мин.
6.1.4. Изотонический 0,85-процентный раствор
хлористого натрия
Для приготовления изотонического раствора, активной кислотностью (7,0 +/- 0,1) ед. pH, используют дистиллированную воду, pH которой проверяют индикатором бромтимолблау. При его добавлении цвет воды должен быть бутылочно - зеленым. В иных случаях воду не используют.
В 1,0 куб. дм воды растворяют 8,5 г хлористого натрия, разливают раствор в чистые пробирки, диаметром 18 - 20 мм, по 10,0 куб. см, а в колбы - по 93,0 куб. см и стерилизуют в течение (15 +/- 1) мин. при (121 +/- 1) град. С.
6.1.5. Приготовление раствора лимонно - кислого натрия
для приготовления разведений сыра
В 1000,0 куб. см дистиллированной воды растворяют 20 г трехзамещенного лимонно - кислого натрия, разливают в пробирки по 10,0 куб. см и колбы по 93,0 куб. см и стерилизуют при (121 +/- 1) град. С в течение (20 +/- 1) мин.
6.1.6. Стерильная дистиллированная вода
Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимых количествах и стерилизуют в течение (20 +/- 1) мин. при (121 +/- 1) град. С.
6.1.7. Раствор двууглекислого натрия для нейтрализации
проб кисло - молочных продуктов и закваски
10 г двууглекислого натрия помещают в мерную колбу, вместимостью 100 куб. см, растворяют дистиллированной водой, доводят объем раствора до метки. Раствор разливают

Медицинское законодательство »